Stanovení počtu aerobních sporotvorných bakterií
Určený objem tekutého vzorku či výchozí suspenze u ostatních vzorků se roztírá na neselektivní živnou půdou v Petriho miskách, např. krevní agar (KA). Před vlastním očkováním se provede tepelná inaktivace vzorku záhřevem na teplotu 80 °C po dobu 10 minut. Jejím účelem je devitalizace vegetativních forem sporotvorných baktérií a ostatních mikroorganismů. Inokulované plotny se inkubují aerobně při 30 °C po dobu 72 hodin. Stanoví se počet aerobních sporotvorných baktérií v 1 ml nebo 1 g vzorku z počtu kolonií vyrostlých na vybraných plotnách.
Postup metody:
Odebereme zkušební vzorek a připravíme výchozí ředění.
Do sterilní zkumavky odebereme 10 ml tekutého vzorku či výchozí suspenze ostatních vzorků. Zkumavku zahříváme ve vodní lázni tak, aby došlo k zahřátí jejího obsahu na teplotu 80 °C po dobu 10 minut. Po ukončení záhřevu obsah zkumavky prudce ochladíme.
Tepelně inaktivovanou suspenzi očkujeme roztěrem na povrch krevního agaru v Petriho miskách, a to vždy jinou sterilní pipetou po 0,2 ml souběžně na dvě řádně označené misky. Doba mezi ukončením záhřevu a okamžikem, kdy se inokulum roztírá na půdu, nesmí překročit 15 minut.
Inokulované misky necháme zaschnout po dobu asi 15 minut při laboratorní teplotě, následně je obrátíme dnem vzhůru a inkubujeme aerobně při teplotě 30 °C po dobu 72 hodin.
Po ukončení inkubace spočítáme kolonie narostlé na každé misce. Pro výpočet použijeme misky obsahující 10 – 150 kolonií.
Schéma – stanovení počtu aerobních sporotvorných baktérií v potravinách:
