Průkaz hydrolýzy hippurátu - HIPPURATEtest
Princip metody:
HIPPURATEtest je určen pro stanovení schopnosti bakterií hydrolyzovat hippurát sodný. Je doporučovaný pro presumptivní identifikaci streptokoků skupiny B, Gardnerella vaginalis a Campylobacter jejuni. Hippurát je štěpen enzymem hippurát hydroláza na glycin a kyselinu benzoovou. Uvolněný glycin je detekován barevnou reakcí s roztokem ninhydrinu.
Pracovní postup:
Čistou kulturu testovaného kmene homogenizujeme v 0,5 ml sterilního fyziologického roztoku ve zkumavce tak, aby vzniklý zákal odpovídal 2. stupni McFarlandovy zákalové stupnice. Do připravené suspenze vložíme diagnostický proužek, papírová zóna proužku musí být zcela ponořena. Zkumavku inkubujeme v termostatu při teplotě 37 °C po dobu 22 – 24 hodin. Po ukončení inkubace přidáme do zkumavky 4 kapky činidla pro HIP (ninhydrin) a necháme 5 – 10 minut stát při laboratorní teplotě.
Hodnocení:
Po uplynutí inkubační doby hodnotíme výsledné zbarvení ve zkumavce.
Hodnocení testu
|
Test |
Označení testu |
Výsledná barevná reakce |
|
|
pozitivní |
negativní |
||
|
Hippurát sodný |
HIP |
modrý a modrofialový prstenec |
bezbarvá až slabě modrá |