COLI test

Princip metody:

COLItest slouží k průkazu enzymu ß-D-glukuronidázy a tvorby indolu z aminokyseliny tryptofanu, tedy k rychlé identifikaci izolátů E. coli. Enzym ß-D-glukuronidáza štěpí 4-metylumbelliferyl-ß-D-glukuronid, vzniklý 4-metylumbelliferon vykazuje pod UV modrou fluorescenci. Tvorba indolu je závislá na zvýšeném obsahu tryptofanu v médiu a vyžaduje nepřítomnost glukózy. Přítomnost indolu se indikuje přídavkem p-dimethylaminobenzaldehydu (Kovácsovo činidlo). V pozitivním případě vzniká sytě růžový až červený reakční produkt, negativní reakce je charakterizována světle žlutohnědým zbarvením. Reakce je typická pro E. coli, naopak Salmonella spp. dává negativní reakci. Negativní ß-D-glukuronidáza je dále typická pro E. coli O157.

Pracovní postup:

Čistou kulturu testovaného kmene homogenizujeme v 1 ml sterilního fyziologického roztoku ve zkumavce tak, aby vzniklý zákal odpovídal 3. stupni McFarlandovy zákalové stupnice. Zkumavku inkubujeme v termostatu při teplotě 37 °C po dobu 4 hodin.

Hodnocení:

Po uplynutí inkubační doby nejprve pozorujeme na transiluminátoru při UV 360 nm tvorbu modré fluorescence. Poté přikápneme do zkumavky 4-5 kapek Kovácsova činidla a hodnotíme výsledné zbarvení ve zkumavce (prstenec na povrchu).

Hodnocení testu

Film COLItest