Metoda
je založena na vysoce specifické vazebné reakci mezi antigenem a
protilátkou. Pro metodu ELISA je typické: a) značení detekčních
protilátek pomocí enzymů, které katalyzují přeměnu substrátu na
barevný produkt; b) adsorpce či kovalentní navázání protilátek na
vhodný nosič (zkumavka, jamka mikrotitrační destičky, atd.), což
usnadňuje separaci imunochemicky navázaných molekul. Vyhodnocení
metody je vizuální nebo spektrofotometrické. ELISA testy jsou obecně
vysoce specifické a využívají se k detekci specifických
mikroorganismů, proteinů nebo toxinů.
V komerčních
testech se nejčastěji využívá tzv. sandwich ELISA, kdy
jsou na detekovaný antigen navázány 2 protilátky –
imobilizovaná a enzymaticky značená.
Schéma
– hlavní kroky metody sandwich ELISA:
Krok 1
Krok 2
Na povrch testovací jamky jsou adsorbovány protilátky specifické
pro cílový antigen.
Do jamky přidáme pomnožený vzorek potraviny.
Cílové antigeny se vážou na specifické protilátky.
Následným promýváním odstraníme zbytky vzorku a nenavázaný
antigen.
Krok 3
Krok 4
Do jamky přidáme enzymaticky značené protilátky.
Protilátky se váží na antigen a vytváří „sandwich“.
