1. Průkaz glykozidáz – pestrá řada cukrů
Princip metody:
Pestrá řada cukrů slouží ke sledování schopnosti mikroorganismů využívat různé druhy cukrů. Testy jsou prováděny v tekuté půdě s přídavkem 0,5-1 % substrátu, kterým jsou sacharidy, glykosidy nebo vícesytné alkoholy. Nejčastěji se testuje schopnost utilizovat glukózu, laktózu, sacharózu, ribózu, dále trehalózu, sorbitol, rhamnózu, inositol, manitol, rafinózu, atd. K detekci se používá acidobazický indikátor (např. bromthymolová modř, bromkrezolový purpur, fenolová červeň). V pozitivním případě dochází zkvašováním substrátu ke tvorbě organických kyselin, které okyselují médium a způsobí změnu indikátoru, tj. reakční směs změní barvu z původní zelené, resp. červené, na žlutou. Při použití plynovky můžeme současně prokázat také tvorbu plynu (bublina v plynovce).
Pracovní postup:
Připravené bujóny rozplňujeme po 10 ml do zkumavek a opakovaně sterilizujeme varem v Kochově hrnci (3x). Do zkumavek s glukózovým, příp. laktózovým bujónem přidáme sterilní skleněnou plynovku. Sterilní bakteriologickou kličkou nabereme čistou kulturu testovaného mikroorganismu a zaočkujeme ji do zkumavek s cukernými bujóny. K očkování lze použít i suspenzi testovaného mikroorganismu ve sterilním fyziologickém roztoku. Naočkované zkumavky inkubujeme při 37 °C po dobu 24 – 48 hodin.
Hodnocení:
Hodnocení provádíme po 24, resp. 48 hodinách inkubace. Sledujeme změnu barvy média (zežloutnutí), zákal, blanku či sediment svědčící o růstu mikroorganismů a přítomnost bublinek plynu v plynovce.
2. Průkaz glykozidáz – TSI agar
Princip metody:
TSI agar (Triple Sugar Iron agar, Hajnův agar) obsahuje tři základní cukry – glukózu, laktózu a sacharózu, a železité soli. Enzymatickou činností mikroorganismů dochází ke změně původně červené barvy média na žlutou, a to v různém rozsahu dle spektra využívaných cukrů. Současně lze sledovat produkci plynu a tvorbu sirovodíku.
Pracovní postup:
TSI agar se připravuje jako šikmý agar s vyšším klínem. Jednotlivé cukry jsou na základě své molekulové hmotnosti rozděleny následovně: dole sacharóza, uprostřed glukóza a v horním klínu laktóza. Toto rozdělení umožňuje dobře rozpoznat zkvašování jednotlivých cukrů. Očkování testované bakteriální kultury se provádí vpichem do agarového sloupce a následně hadovitým rozočkováním po povrchu klínu.
Hodnocení:
Po ukončení inkubace hodnotíme změnu barvy kultivační půdy, tvorbu plynu (potrhání agaru) a tvorbu sirovodíku (černání kolem vpichu). Zkvašuje-li mikroorganismus pouze glukózu, zežloutne jen sloupec a šikmá plocha zůstane červená (např. salmonely). Pokud testovaný mikroorganismus zkvašuje současně s glukózou i laktózu či sacharózu, příp. všechny tři cukry, zežloutne sloupec i šikmá plocha (např. E. coli).