Metoda průkazu termotolerantních druhů rodu Campylobacter

Průkaz:

Termotolerantní druhy kampylobakteru jsou schopné růstu při 42 °C. Jejich průkaz v potravinách zahrnuje 3 po sobě jdoucí stupně:

• pomnožení v tekuté selektivní půdě
• vyočkování
• konfirmaci

Předpokládá-li se přítomnost velkého množství termotolerantních kampylobakterů, lze výchozí suspenzi vyočkovat kličkou přímo na povrch selektivních agarových půd.

Princip:

Zkoušený vzorek se inokuluje do tekuté půdy pro selektivní pomnožení – bujón podle Boltona a inkubuje se mikroaerofilně při 42 °C po dobu 18 hodin. Získaná kultura ze selektivního pomnožení se vyočkovává na dvě pevné selektivní půdy napr. deoxycholátový agar s aktivním uhlím a cefoperazonem (mCCDA agar) nebo agar podle Karmaliho. Naočkované misky se inkubují mikroaerofilně při 42 °C po dobu 40-48 hodin a zjištuje se přítomnost suspektních kolonií termotolerantních druhů rodu Campylobacter.

Morfologie charakteristických kolonií:

• mCCDA agar – po 48 hodinách inkubace jsou charakteristické kolonie šedavě zbarvené, ploché a vlhké s tendencí se šírit, na povrchu s kovovým leskem.
• Karmali agar – po 48 hodinách inkubace jsou charakteristické kolonie šedavě zbarvené, ploché a vlhké s tendencí se šírit.

Konfirmace:

Při hodnocení sledujeme nárůst kolonií charakteristických pro termotolerantní druhy rodu Campylobacter. Pro konfirmaci vybereme z každé plotny 5 charakteristických kolonií.

Suspektní kolonie jsou konfirmovány biochemicky:

• kataláza
• oxidáza
• produkce H₂S
• růst při 25 °C a při 37 °C aerobně.

Druhové zařazení je prováděno podle:

• rezistence izolátu k cephalotinu a ke kyselině nalidixové
• odlišení druhů C. jejuni a C. coli se provádí na základě hydrolýzy hippurátu