Průkaz:
Pro průkaz
Escherichia coli v potravinách se využívá selekčního tlaku
zvýšené kultivační teploty (44-45 °C) a
selekčních činidel potlačujících růst grampozitivních bakterií (např. žlučové soli, tergitol či laurylsulfát). Z biochemických vlastností je to schopnost vytvářet z tryptofanu
indol a průkaz aktivity enzymu
ß-D-glukuronidázy.
Současný trend směřuje k používání
chromogenních médií. Ke stanovení počtu
E. coli se běžně používají půdy s jedním chromogenem pro průkaz ß-D-glukuronidázy, který obsahuje modrozelený chromofor. Dále lze použít půdy s dvěma chromogeny – pro průkaz ß-D-glukuronidázy (modrozelený chromofor) a pro průkaz ß-D-galaktosidázy (lososově červený chromofor), které umožňují odlišit
E. coli (modro fialová - obsahuje oba enzymy), další koliformní bakterie a ß-D-glukuronidáza negativní kmeny
E. coli (červená - obsahují pouze ß-D-galaktosidázu) a další gramnegativní bakterie (bezbarvé – nemají žádný z uvedených enzymů).
Princip:
Určený objem tekutého vzorku, výchozí suspenze u ostatních výrobků a jejich desetinásobných ředění se zalévá selektivní chromogenní živnou půdou v Petriho miskách. Jako arbitrážní půda je určen
tryptonový agar se žlučovými solemi obsahující kyselinu 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glukuronovou (TBA s BCIG) = angl.
Tryptone Bile X-glucuronide medium (TBX). Naočkované plotny se inkubují aerobně při 44 °C po dobu 18-20 hodin. Z počtu suspektních kolonií vyrostlých na vybraných miskách se vypočte počet ß-D-glukuronidáza pozitivních
Escherichia coli v 1 ml nebo 1 g vzorku.
Alternativní metoda: Vzorek lze také očkovat roztěrem na povrch TBX agaru, a to 0,2 ml inokula souběžně do dvou řádně označených Petriho misek.
Morfologie charakteristických kolonií:
Po 18-20 hodinách kultivace mají kolonie narostlé na TBX agaru modrou, příp. modrozelenou barvu a průměr 0,5-2 mm.
;){kind=link}