Metoda průkazu bakterií rodu Salmonella

Průkaz:

Průkaz bakterií rodu Salmonella se v potravinách provádí většinou kvalitativně, tzn. jedná se o průkaz nebo vyloučení přítomnosti salmonel v předepsané navážce vzorku, obvykle 25 g nebo 25 ml.
Zahrnuje 4 po sobě jdoucí stupně:

1) pomnožení v neselektivní tekuté půdě
2) pomnožení v selektivní tekuté půdě
3) vyočkování
4) konfirmaci.

Princip:

Zkoušený vzorek se inokuluje do tekuté půdy pro neselektivní pomnožení – pufrovaná peptonová voda (PPV médium), a inkubuje se aerobně při 37 °C po dobu 16-20 hodin. Získaná kultura se preočkuje do dvou tekutých selektivních půd – Rappaport Vassiliadis sója médium (RVS médium) a Mueller-Kauffman tetrathionát novobiocin médium (MKTTn médium). RVS médium se inkubuje aerobně při 42 °C po dobu 24 hodin a MKTTn médium pri 37 °C po dobu 24 hodin. Ze selektivního pomnožení se provádí vyočkování na dvě pevné selektivní půdy – agar s xylózou, lyzinem a dezoxycholátem (XLD agar) a kteroukoli jinou selektivní půdu např. agar s fenolovou červení a brilantovou zelení (BR agar) nebo chromogenní agar pro stanovení salmonel (např. Rambach agar). Naočkované misky se inkubují aerobně při 37 °C po dobu 24-48 hodin a zjišťuje se přítomnost suspektních kolonií bakterií rodu Salmonella.

Morfologie charakteristických kolonií:

XLD agar

a) kolonie laktóza-negativních bakterií (salmonely) jsou průsvitné s černým středem, o průmeru 2 mm a v jejich okolí dochází ke zmeně barvy půdy z oranžové do červena

b) kolonie laktóza-pozitivních bakterií (koliformní bakterie) jsou jasně žluté barvy s černým středem obklopené žlutou zónou, o průmeru 2 mm

BR agar

a) kolonie laktóza-negativních bakterií (salmonely) jsou průsvitné o průměru 2 mm a v jejich okolí dochází ke zmeně barvy půdy do pivoňkově červené

b) kolonie laktóza-pozitivních bakterií (koliformní bakterie) jsou jasně žlutozelené barvy o průmeru 2 mm, podobně se barví i půda v okolí kolonií

Rambach agar

typické kolonie salmonel rostou jasně červeně, ostatní v odstínech od vínové až po modrou. Velikost kolonií je kolem 1,5 mm.

Konfirmace:

Při hodnocení sledujeme nárůst kolonií suspektních pro bakterie rodu Salmonella. Pro konfirmaci vybereme z každé plotny 5 suspektních kolonií. Kolonie vybrané pro konfirmaci subkultivujeme vyočkováním na masopeptonový agar (MPA).
Při biochemické konfirmaci standardně provedeme následující testy:

• růst na TSI agaru
  
• průkaz štěpení močoviny
  
• průkaz lyzindekarboxylázy
  
• průkaz ß-galaktozidázy
  
• VP test
  
• průkaz tvorby indolu

Serologická konfirmace (sérotypizace) je zaměřena na průkaz O, H a Vi antigenu aglutinační reakcí. Na základě reakce s antiséry zaradímě testovanou kulturu podle Kaufman-White schématu.