Metoda průkazu bakterií mléčného kvašení

Průkaz:

Půdy určené pro stanovení laktobacilů jsou nutričně obohacené kvasničným extraktem, glukózou a Tweenem 80, růst ostatních mikroorganismů je potlačen přítomností inhibičních složek (citrát amonný, octan sodný) a nízkého pH (kolem 5,4).

Princip:

Určený objem tekutého vzorku, výchozí suspenze u ostatních výrobků a jejich desetinásobných ředění se zalévá agarovou živnou půdou v Petriho miskách. Jako arbitrážní půda je určen Man, Rogosa a Sharpe agar (MRS agar) o pH 5,7. Naočkované plotny se inkubují aerobně při 30 °C po dobu 72 hodin. Lze použít i techniku očkování na povrch půdy roztěrem v kombinaci s inkubací za anaerobních nebo mikroaerofilních podmínek. Stanoví se počet mikroorganismů v 1 ml nebo 1 g vzorku z počtu kolonií vyrostlých na vybraných miskách.
Alternativní metoda: Vzorek lze očkovat roztěrem na povrch MRS agaru, a to 0,2 ml inokula souběžně do dvou řádně označených Petriho misek. Naočkované plotny inkubujeme za anaerobních či mikroaerofilních podmínek. Po ukončení inkubace spočítáme kolonie narostlé na každé misce. Pro výpočet použijeme misky obsahující ne více než 150 kolonií ve dvou po sobě jdoucích ředěních. Je nutné, aby jedna z těchto misek obsahovala alespoň 15 kolonií. Pro svou podobnost s kvasinkami je vhodné odlišit kolonie laktobacilů mikroskopickým vyšetřením. Počet mezofilních bakterií mléčného kvašení vyjádříme jako počet KTJ v 1 ml nebo 1 g vzorku.

Morfologie charakteristických kolonií:

Po 3 dnech kultivace na MRS agaru jsou kolonie laktobacilů pravidelné, okrouhlé, hladké, spíše bezbarvé o průměru 0,5 – 2 mm, charakteristickým znakem je nakyslý zápach.