Metoda průkazu kvasinek a plísní

Průkaz:

Stanovení kvasinek a plísní je založeno na použití selekčních činidel potlačujících růst doprovodné bakteriální mikroflóry, nejčastěji se jedná o živné půdy s nízkým pH (sladinkový agar), nebo živné půdy s přídavkem antibiotik. Standardně se dle metodiky ISO používá agar s kvasničným extraktem, glukózou a chloramfenikolem, který může být nahrazen oxytetracyklinem. Inkubace probíhá při teplotě 20 až 25 °C po dobu 5 dní. Ve sporných případech musí být kultivace doplněna mikroskopickým vyšetřením.

Princip:

Určený objem tekutého vzorku, výchozí suspenze u ostatních výrobků a jejich desetinásobných ředění se zalévá agarovou živnou půdou v Petriho miskách. Jako arbitrážní půda je určen agar s kvasničným extraktem, glukózou a chloramfenikolem (GKCH agar). Naočkované plotny se inkubují aerobně při 25 °C po dobu 5 dnů. Stanoví se počet kvasinek a plísní v 1 ml nebo 1 g vzorku z počtu kolonií vyrostlých na vybraných miskách.
Alternativní metoda: Vzorek lze očkovat roztěrem 0,2 ml inokula na povrch živné půdy souběžně do dvou řádně označených Petriho misek. V tomto případě lépe vzájemně odlišíme kvasinky a plísně.
Na každé z ploten spočítáme narostlé kolonie po 3, 4 a 5 dnech inkubace, v případě plísní můžeme inkubaci prodloužit až na 7 dní. Po pěti dnech inkubace vybereme pro stanovení počtu misky obsahující ne více než 150 kolonií ve dvou po sobě jdoucích ředěních. Počet kvasinek a počet plísní vyjádříme jako počet KTJ v 1 ml nebo 1 g vzorku.

Morfologie charakteristických kolonií:

Po 5 dnech kultivace jsou kolonie kvasinek pravidelné, okrouhlé, hladké, bílé či smetanové barvy (výjimečně pigmentované) o průměru 3-5 mm. Charakteristickým znakem je kvasničný zápach a tvarohovitá konzistence kolonií. Na povrchu kultivačního média rostou plísně v obrovských (i několik cm) plstnatých či vatovitých různě zbarvených koloniích (např. bílé, černé, modrozelené, červenooranžové).