Metoda průkazu lipolytických bakterií

Průkaz:

Pro stanovení lipolytických mikroorganismů se používají elektivní půdy, na kterých rostou i jiné druhy mikroorganismů, ale netvoří typické kolonie. Pro stanovení lipolytických mikroorganismů půdy s přídavkem tuků (např. Tweenu).

Princip:

Lipolytické mikroorganismy produkují lipázy hydrolyzující tuk, což se vizuálně projeví vytvoření zóny precipitace okolo kolonií. Určený objem tekutého vzorku, výchozí suspenze u ostatních výrobků a jejich desetinásobných ředění se roztírá na agarovou živnou půdou v Petriho miskách, např. agar s želatinou a Tweenem (TW agar). Naočkované plotny se inkubují aerobně při 30 °C po dobu 72 hodin. Stanoví se zvlášť počet proteolytických a lipolytických mikroorganismů v 1 ml nebo 1 g vzorku z počtu kolonií vyrostlých na vybraných miskách.

Morfologie charakteristických kolonií:

Po ukončení inkubace spočítáme nejprve kolonie lipolytických mikroorganismů, které jsou obklopeny zónou precipitace. Poté převrstvíme povrch agaru kyselým roztokem chloridu rtuťnatého a spočítáme kolonie proteolytických mikroorganismů, kolem kterých se objeví zóna projasnění. Pro výpočet použijeme misky obsahující ne více než 150 kolonií ve dvou po sobě jdoucích ředěních. Je nutné, aby jedna z těchto misek obsahovala alespoň 15 kolonií. Zvlášť vyjádříme počet proteolytických a lipolytických mikroorganismů jako počet KTJ v 1 ml nebo 1 g vzorku.