Stanovení E. coli O157 v potravinách
Princip metody:
Průkaz Escherichia coli O157 vyžaduje 4 po sobě jdoucí stupně:
pomnožení zkušebního vzorku, který se homogenizuje v modifikovaném bujónu s enzymaticky natráveným kaseinem a sójou a s přídavkem novobiocinu (mTSB + N), inkubace probíhá aerobně při 41,5 °C po dobu 18 – 24 hodin.
koncentraci a separaci zjišťovaných baktérií pomocí imunomagnetických částic, na jejichž povrch byla nanesena protilátka vůči antigenu O157.
izolaci imunomagnetických částic s adherovanými baktériemi subkultivací na MacConkey agaru s cefiximem, teluričitanem draselným a sorbitolem (CT-SMAC) a dále na druhé selektivní půdě (např. SMAC s BCIG, chromogenní agar. Vyočkování imunomagnetických částic se provádí sterilní bakteriologickou kličkou, inokulované plotny se obvykle inkubují aerobně při 37 °C po dobu 18 – 24 hodin.
konfirmaci sorbitol negativních kolonií z půdy CT-SMAC (průhledné, bezbarvé až světle žlutohnědé kolonie o průměru asi 1 mm) a typických kolonií z druhé kultivační půdy, a to na základě tvorby indolu a aglutinace s antisérem vůči antigenu O157 a je-li k dispozici i s antisérem pro bičíkový antigen H7. Na základě výsledků konfirmace potvrdíme nebo vyloučíme přítomnost Escherichia coli O157 v navážce vyšetřovaného vzorku.
Schéma – stanovení E. coli O157 v potravinách:
